臺(tái)盼藍(lán)染色劑屬于活體染色劑嗎（臺(tái)盼藍(lán)染色活細(xì)胞）

關(guān)于臺(tái)盼藍(lán)染色劑屬于活體染色劑嗎，臺(tái)盼藍(lán)染色活細(xì)胞這個(gè)問(wèn)題很多朋友還不知道，今天小六來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題，現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！

1、一. 臺(tái)盼藍(lán)配制：4％臺(tái)盼藍(lán)母液：稱(chēng)取4克臺(tái)盼藍(lán)，加入少量蒸餾水研磨，加0.9%NaCl至100毫升，用濾紙過(guò)濾，4℃保存。

2、或者直接用0.9%的生理鹽水或者PBS配成母液 用的時(shí)候用生理鹽水或者PBS稀釋 。

3、臺(tái)盼藍(lán)染色步驟：1.、4%臺(tái)盼藍(lán)母液：稱(chēng)取4g臺(tái)盼藍(lán)，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過(guò)濾，4度保存。

4、使用時(shí)。

5、用PBS稀釋至0.4%。

6、（也可買(mǎi)Gibco的成品）; T 　　2、胰酶消化貼壁細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液，并作適當(dāng)稀釋。

7、 　3、染色：細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9:1混合混勻。

8、（終濃度0.04%） 　　4、計(jì)數(shù)：在三分鐘內(nèi)，分別計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞。

9、 　　5、鏡下觀察，死細(xì)胞被染成明顯的藍(lán)色，而活細(xì)胞拒染呈無(wú)色透明狀。

10、 　　6、統(tǒng)計(jì)細(xì)胞活力：活細(xì)胞率（%）= 活細(xì)胞總數(shù)/（活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù)）×100%二. 結(jié)晶紫配制： 結(jié)晶紫 2.0g 草酸銨 0.8g 95％酒精 20ml 餾水 80ml 先將結(jié)晶紫溶于酒精，草酸銨溶于蒸餾水中，然后將兩液混合，靜置48小時(shí)使用。

11、此染液穩(wěn)定，置密閉的棕色瓶中可儲(chǔ)存數(shù)月。

12、結(jié)晶紫染色步驟： 1．在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164細(xì)胞的培養(yǎng)液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3小時(shí)，讓細(xì)胞帖壁。

13、 　　2．用RPMI-1640培養(yǎng)液10倍遞次稀釋TNF標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)需要3～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品或待檢樣品，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)孔。

14、對(duì)照孔6個(gè)，3個(gè)陽(yáng)性對(duì)照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培養(yǎng)液，3個(gè)陰性對(duì)照孔各加100μl RPMI-1640培養(yǎng)液。

15、繼續(xù)培養(yǎng)18～24小時(shí)。

16、 　　3．甩去培養(yǎng)液，用PBS小心洗滌一次，每孔加0.1ml 10％甲醇溶液固定細(xì)胞30秒鐘。

17、 　　4．吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml結(jié)晶紫染液，室溫中放置20分鐘。

18、 　　5．輕輕甩去染色液，用蒸餾水洗滌各孔，將培養(yǎng)板倒置于吸水紙上吸干水分。

19、自然干燥或37℃烘干。

20、此板可以在室溫中長(zhǎng)期保存。

21、 　　6．測(cè)定前，每孔加0.1ml 33％醋酸脫色，充分振蕩后在570nm處測(cè)定光吸收度。

22、用光吸收度（OD）值對(duì)樣品稀釋度作圖，比較標(biāo)準(zhǔn)品曲線(xiàn)和待檢樣品曲線(xiàn)即可得到待測(cè)樣品中的細(xì)胞因子活性。

本文分享完畢，希望對(duì)大家有所幫助。

標(biāo)簽：