導(dǎo)讀 關(guān)于克隆基因用什么技術(shù),基因克隆技術(shù)包括哪些這個(gè)問(wèn)題很多朋友還不知道,今天小六來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題,現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧!1、
關(guān)于克隆基因用什么技術(shù),基因克隆技術(shù)包括哪些這個(gè)問(wèn)題很多朋友還不知道,今天小六來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題,現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧!
1、基因克隆的方法主要有哪幾種選擇目的基因,并設(shè)計(jì)相應(yīng)引物;用引物PCR擴(kuò)增目的基因片段;選擇合適(抗性標(biāo)記、酶切位點(diǎn)等)的克隆載體(為了保真擴(kuò)增),并將PCR片段連接入克隆載體中;(一般用Taq酶的PCR產(chǎn)物在末尾會(huì)自帶一個(gè)A,可在Solution 1作用下與兩端各帶一個(gè)T的線性T載體直接相連)將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)大腸桿菌,使之在含有抗生素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)擴(kuò)增;從大腸桿菌中提取質(zhì)粒(即前面的連接產(chǎn)物),酶切鑒定和測(cè)序鑒定均無(wú)誤后將目的基因片段切下并與新的表達(dá)載體連接,然后再次轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中擴(kuò)增,再提質(zhì)粒,即得到想要的目的基因片段克隆.。
本文分享完畢,希望對(duì)大家有所幫助。
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