關(guān)于bradford法測蛋白含量原理，bradford法測蛋白濃度這個問題很多朋友還不知道，今天小六來為大家解答以上的問題，現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！
1、一、原理不同BCA蛋白定量：堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，吸光強度與蛋白濃度成正比。
2、測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。
3、Bradford法蛋白定量：在一定的濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物在波長為595nm處的光吸收與蛋白質(zhì)含量成正比，通過測定595nm處光吸收的增加量可知與其結(jié)合蛋白質(zhì)的量。
4、二、樣品中物質(zhì)含量不同BCA蛋白定量：樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。
5、Bradford法蛋白定量：樣品中SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。
6、擴展資料BCA蛋白定量的注意事項：BCA蛋白定量時，吸光度可隨時間的延長不斷加深，且顯色反應(yīng)會隨溫度升高而加快，故如果濃度較低，適合較高溫度孵育or延長孵育時間。
7、2、標準蛋白液的加量應(yīng)當(dāng)準確，如果加量不準確，會導(dǎo)致制作出來的標準曲線出現(xiàn)偏差，影響待測樣品的濃度計算，所以一方面需要用梯度稀釋的方法來配置標準蛋白液，另一方面應(yīng)使用精確度高的移液槍。
8、3、為加快BCA蛋白定量測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但切勿過熱。
9、?4、當(dāng)結(jié)果出現(xiàn)空白組本身就有較高的背景，可用Bradford法蛋白定量重新測定蛋白濃度。
10、參考資料來源:百度百科-蛋白定量。
本文分享完畢，希望對大家有所幫助。
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