抗凝劑種類(lèi)五種（抗凝劑）

關(guān)于抗凝劑種類(lèi)五種，抗凝劑這個(gè)問(wèn)題很多朋友還不知道，今天小六來(lái)為大家解答以上的問(wèn)題，現(xiàn)在讓我們一起來(lái)看看吧！

1、應(yīng)用物理或化學(xué)方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，稱(chēng)為抗凝。

2、能夠阻止血液凝固的化學(xué)試劑或物質(zhì)，稱(chēng)為抗凝劑或抗凝物質(zhì)。

3、如天然抗凝劑（肝素，水蛭素等） Ca+2鰲合劑（檸檬酸鈉，氟化鉀） 原理：使凝血酶原不能激活，Ca+2是凝血因子IV，其他的是蛋白類(lèi)》.離心技術(shù)是根據(jù)顆粒在勻迷圓周運(yùn)動(dòng)時(shí)受到一個(gè)外向的離心力的行為發(fā)展起來(lái)的一種分離分析技術(shù)。

4、 1．用于工業(yè)生產(chǎn)的，如化工、制藥、食品等工業(yè)大型制備用的離心技術(shù)，轉(zhuǎn)速都在每分鐘5000轉(zhuǎn)以下。

5、 2．用于生物、醫(yī)學(xué)、化學(xué)等實(shí)驗(yàn)室分析研究的，轉(zhuǎn)速?gòu)拿糠昼妿浊У綆兹f(wàn)轉(zhuǎn)以上，此類(lèi)技術(shù)的使用目的在于分離和純化樣品，以及對(duì)純化樣品的有關(guān)性能進(jìn)行研究。

6、 一、基本原理 1．離心力Centrifugal force (F) F=mω2r ω：旋轉(zhuǎn)角速度(弧度／秒) r:旋轉(zhuǎn)體離旋轉(zhuǎn)軸的距離(cm) m：顆粒質(zhì)量 2．相對(duì)離心力 Relative centrifugal force (RCF) RCF 就是實(shí)際離心力轉(zhuǎn)化為重力加速度的倍數(shù) RCF=F離心力／F重力 = mω2r/mg= ω2r/g g為重力加速度(980．70g/sec2) 同為轉(zhuǎn)于旋轉(zhuǎn)一周等于2π弧度，因此轉(zhuǎn)子的角速度以每分鐘旋轉(zhuǎn)的次數(shù)(每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)n或r/min)表示： 一般情況下，低速離心時(shí)常以r／min來(lái)表示，高速離心時(shí)則以g(或數(shù)字Xg)表示。

7、 用“X g”表示每分鐘轉(zhuǎn)速可以真實(shí)反映顆粒在離心管不同位置的離心力。

8、Dole&Cotzias制作了轉(zhuǎn)子速度和半徑相對(duì)應(yīng)的離心力列線圖(圖2—15)。

9、 3．沉降系數(shù) Sedimentation coefficient (S) 當(dāng)轉(zhuǎn)子內(nèi)樣品繞著旋轉(zhuǎn)軸離心時(shí)，樣品沉降率是由樣品顆粒的大小、形狀、密度和溶劑的粘度、密度以及離心加速度決定的，在一般情況下，樣品的沉降特征可以用沉降系數(shù)來(lái)表示： S：是指單位離心場(chǎng)中粒子移動(dòng)的速度。

10、 S的物理意義是顆粒在離心力作用下從靜止?fàn)顟B(tài)到達(dá)等速運(yùn)動(dòng)所經(jīng)過(guò)的時(shí)間。

11、 S在實(shí)際應(yīng)用時(shí)常在10-13秒左右，故把沉降系數(shù)10-13秒稱(chēng)為一個(gè)Svedberg單位，簡(jiǎn)寫(xiě)S，單位為秒，1S二1×10-13秒。

12、對(duì)一定的樣品，在一定的介質(zhì)中，樣品沉降系數(shù)S也常保持不變。

13、文獻(xiàn)中常用沉降系數(shù)以描述某些生物大分子或亞細(xì)胞器大小。

14、 二、離心設(shè)備 離心技術(shù)所使用的設(shè)備是由離心轉(zhuǎn)子、離心管及附件等組成。

15、 (一)離心機(jī) 1. 低速離心機(jī) 一般最高轉(zhuǎn)速在6000r/min以下。

16、實(shí)驗(yàn)室中常用于分離制備。

17、 2．高速離心機(jī) 帶有能夠冷卻的離心腔制冷設(shè)備，這類(lèi)離心機(jī)的速度控制比上述的低速離心機(jī)來(lái)得準(zhǔn)確，工作時(shí)的實(shí)際速度和溫度可通過(guò)儀表顯示；配有一定類(lèi)型及規(guī)格的轉(zhuǎn)子，可根據(jù)需要選用。

18、此類(lèi)離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速在25000r／min以下，常用于生物大分子的分離制備。

19、 3．超速離心機(jī) 由四個(gè)部分組成，即驅(qū)動(dòng)和速度控制；溫度控制；真空系統(tǒng)以及轉(zhuǎn)于。

20、至今超迷離心機(jī)最高轉(zhuǎn)速為85000-／min(可達(dá)600，000g左右)。

21、常用于分離亞細(xì)胞器、病毒粒于、DNA、RNA和蛋白質(zhì)分于，在分離時(shí)無(wú)須加入可能引起被分離物質(zhì)結(jié)構(gòu)改變的物質(zhì)，故為觀察它們的“天然”結(jié)構(gòu)與功能提供了手段。

22、 (二)轉(zhuǎn)子 主要有三種： 固定角式轉(zhuǎn)子(fixed—angle rotor)；水平轉(zhuǎn)子(swing—out rotor)；垂直轉(zhuǎn)子(vertical rotor)，還有帶狀轉(zhuǎn)子(zonal rotor)和連續(xù)轉(zhuǎn)于(continuous rotor)等。

23、 1．固定角式轉(zhuǎn)子 離心管在離心機(jī)中放置的位置與旋轉(zhuǎn)軸心形成一個(gè)固定的角度，角度變化在14—40°之間，常見(jiàn)的角度有20°、28°、34°及40°等。

24、 因角式轉(zhuǎn)子的重心低，轉(zhuǎn)速可較高，樣品粒子穿過(guò)溶劑層的距離略大于離心管的直徑；又因?yàn)橛幸欢ǖ慕嵌龋试陔x心過(guò)程中撞到離心管外壁的粒子沿著管壁滑到管底形成沉淀，這就是“管壁效應(yīng)”，此效應(yīng)使最后在管底聚成的沉淀較緊密。

25、 2．水平轉(zhuǎn)于 此類(lèi)轉(zhuǎn)于靜止時(shí)，處在轉(zhuǎn)子中的離心管中心線與旋轉(zhuǎn)軸平行，而在轉(zhuǎn)子旋轉(zhuǎn)加速時(shí)，離心管中心線由平行位置逐漸過(guò)渡到垂直位置，即與旋轉(zhuǎn)軸成90‘角，粒子的沉淀方向同旋轉(zhuǎn)半徑方向基本一致，但也有少量的“管壁效應(yīng)”。

26、 由于此類(lèi)轉(zhuǎn)予的重心位置較高，樣品粒子沉降穿過(guò)溶劑層的距離大于直徑。

27、它對(duì)于多種成分樣品分離特別有效，常用于速率區(qū)帶離心和等密度離心。

28、 3．垂直轉(zhuǎn)子 離心管垂直插入轉(zhuǎn)于孔內(nèi)，在離心過(guò)程中始終與旋轉(zhuǎn)軸子行，而離心時(shí)液層發(fā)生90°角的變化，從開(kāi)始的水平方向改成垂直方向，轉(zhuǎn)子降速時(shí)，垂直分布的液層又逐漸趨向水平，待旋轉(zhuǎn)停止后，液面又完全恢復(fù)成水平方向。

29、這是因?yàn)樵谶M(jìn)行密度梯度離心前，由于重力的作用，垂直轉(zhuǎn)予的粒子沉淀距離等于離心管的直徑，離心分離所徭的離心力最小，適用于速率區(qū)帶離心和等密度離心，但一般不用于差速離心。

30、 三、離心分離方法 根據(jù)離心原理，按照實(shí)際工作的需要，目前已有可設(shè)計(jì)出各種離心方法綜合起來(lái)大致可分三類(lèi) 1. 平衡離心法 根據(jù)粒子大小、形狀不同進(jìn)行分離，包括差速離心法(differential velocity centrifugation)和速率區(qū)帶離心法(rate zonal centrifugation)。

31、 2．等密度離心法(isopynic centrifugation)又稱(chēng)等比重離心法，根據(jù)粒子密度差進(jìn)行分離，等密度離心法和上述速率區(qū)帶離心法合稱(chēng)為密度梯度離心法。

32、 3．經(jīng)典式沉降平衡離心法 用于對(duì)生物大分子分子量的測(cè)定、純度估計(jì)、構(gòu)象變化。

33、 (一)差速離心法 它利用不同的粒子在離心力場(chǎng)中沉降的差別，在同一離心條件下，沉降速度不同，通過(guò)不斷增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分步沉淀。

34、操作過(guò)程中一般是在離心后傾倒的辦法把上清液與沉淀分開(kāi)，然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心，分離出第二部分沉淀，如此往復(fù)加高轉(zhuǎn)速，逐級(jí)分離出所需要的物質(zhì)。

35、 差速離心的分辨率不高，沉淀系數(shù)在同一個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)的各種粒子不容易分開(kāi)，常用于其他分離手段之前的粗制品提取。

36、 2．注意點(diǎn)： ①可用角式、水平式轉(zhuǎn)頭 ②可用剎車(chē) ③難以獲得高純度 例：用差速離心法分離已破碎的細(xì)胞各組份 (二)速率區(qū)帶離心法 1．原理 速率區(qū)帶離心法是離心前在離心管內(nèi)先裝入密度梯度介質(zhì)(如蔗糖、甘油、KBr、CsCl等)，待分離的樣品鋪在梯度液的頂部、離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心。

37、離心后在近旋轉(zhuǎn)軸處的介質(zhì)密度最小，離旋轉(zhuǎn)軸最遠(yuǎn)處介質(zhì)的密度最大，但最大介質(zhì)密度必須小于樣品中粒于的最小密度。

38、這種方法是根據(jù)分離的粒子其在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi)分成一系列區(qū)帶，達(dá)到彼此分離的目的。

39、 梯度液在離心過(guò)程中以及離心完畢后，取樣時(shí)起著支持介質(zhì)和穩(wěn)定劑的作用，避免因機(jī)械振動(dòng)而引起已分層的粒子再混合。

40、 該離心法的離心時(shí)間要嚴(yán)格控制，即有足夠的時(shí)間使各種粒子在介質(zhì)梯度中形成區(qū)帶，又要控制在任意一個(gè)粒子達(dá)到沉淀前。

41、如果離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，所有的樣品可全部到達(dá)離心管底部；離心時(shí)間不足，樣品還沒(méi)有分離。

42、由于此法是一種不完全的沉降，沉降受物質(zhì)本身大小的影響較大，一般是應(yīng)用在物質(zhì)大小相異而密度相同的情況。

43、 2．注意點(diǎn)： ①?lài)?yán)格控制離心時(shí)間 ②粒子密度大于介質(zhì)密度 ③樣品事先配制在較平緩的連續(xù)密度的梯度溶液 ④不能用角式轉(zhuǎn)頭、只能用水平式轉(zhuǎn)頭 ⑤不能用剎車(chē) (三)等密度離心法 1．原理 等密度離心法是在離心前預(yù)先配制介質(zhì)的密度梯度，此種密度梯度液包含了被分離樣品中所有粒子的密度，待分離的樣品鋪在梯度液或和梯度液先混合，離心開(kāi)始后，當(dāng)梯度液由于離心力的作用逐漸形成底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時(shí)原來(lái)分布均勻粒子也發(fā)生重新分布。

44、當(dāng)管底介質(zhì)的密度大于粒子的密度，粒子上?。辉趶濏斕幜Ｗ用芏却笥诮橘|(zhì)密度時(shí)，則粒子沉降，最后粒子進(jìn)入到一個(gè)它本身的密度位置即粒子密度等于介質(zhì)密變，此時(shí)dr／dt為零粒子不再移動(dòng)，粒子形成純組分的區(qū)帶，與樣品粒子的密度有關(guān)，而與粒子的大小和其他參數(shù)無(wú)關(guān)，因此只要轉(zhuǎn)速、溫度不變，則延長(zhǎng)離心時(shí)間也不能改變這些粒子的成帶位置。

45、 2．注意點(diǎn)： ①離心時(shí)間要長(zhǎng) ②可用角式轉(zhuǎn)頭或水平式轉(zhuǎn)頭 ③粒子密度相近或相等時(shí)不宜用 ④密度梯度溶液中要包含所有粒子密度 ⑤不能用剎車(chē) 四、梯度溶液的制備 (一)梯度材料的選擇原則： 1．與被分離的生物材料不發(fā)生反應(yīng)，且易與所分離的生物材料分開(kāi)。

46、 2．可達(dá)到要求的密度范圍，且在所要求的密度范圍內(nèi)，粘度低，滲透壓低，離子強(qiáng)度和pH變化較小。

47、 3．不會(huì)對(duì)離心設(shè)備發(fā)生腐蝕作用。

48、 4．容易純化，價(jià)格便宜或容易回收。

49、 5．濃度便于測(cè)定，如具有折光率。

50、 6．對(duì)于分析超迷離心工作來(lái)說(shuō)，它的物理性質(zhì)，熱力學(xué)性質(zhì)應(yīng)該是己知的。

51、 (二)梯度材料的應(yīng)用范圍 下面簡(jiǎn)單介紹幾種常用的密度梯度材料的性質(zhì)及其應(yīng)用范圍。

52、 1．蔗糖：水溶性大，性質(zhì)穩(wěn)定，滲透壓較高，其最高密度可達(dá)1．33g/ml，且由于價(jià)格低，容易制備，是現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室里常用于細(xì)胞器、病毒、RNA分離的梯度材料，但由于有較大的滲透壓，不宜用于細(xì)胞的分離。

53、 2．聚蔗糖：商品名Ficoll，常采用Ficoll—400也就是相對(duì)分子重量為400000，F(xiàn)icoll滲透壓低，但它的粘度卻特別高，為此常與泛影葡胺混合使用以降低粘度。

54、主要用于分離各種細(xì)胞包括血細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、鼠肝細(xì)胞等。

55、 3．氯化銫：是一種離于性介質(zhì)、水溶性大，最高密度可達(dá)1．91g／nd。

56、由于它是重金屬鹽類(lèi)，在離心時(shí)形成的梯度有較好的分辨率，被廣泛地用于DNA、質(zhì)粒、病毒和脂蛋白的分離，但價(jià)格較貴。

57、 4．鹵化鹽類(lèi)：KBr和NaCI可用于脂蛋白分離，KI和NaI可用于RNA分離，其分辨率高于銫鹽。

58、NaCl梯度也可用于分離脂蛋白，NaI梯度可分離天然或變性的DNA。

59、 5．Percoll: 是商品名，它是一種SiO2膠體外面包了一層聚乙烯吡咯酮(PVP)，滲透壓低，它對(duì)生物材料的影響小，而且顆粒穩(wěn)定，在冷卻和凍融情況下還是穩(wěn)定的。

60、其粘度高，在酸性pH和高離子強(qiáng)度下不穩(wěn)定。

61、它可用于細(xì)胞、細(xì)胞器和病毒的分離。

62、 五、分析性超速離心 與制備性超速離心不同的是：分析性超速離心主要是為了研究生物大分子的沉降特性和結(jié)構(gòu)，而不是專(zhuān)門(mén)收集某一特定組分。

63、因此它使用了特殊的轉(zhuǎn)子和檢測(cè)手段，以便連續(xù)地監(jiān)視物質(zhì)在一個(gè)離心場(chǎng)中的沉降過(guò)程。

64、 分析性超速離心的工作原理： 分析性超速離心機(jī)主要由一個(gè)橢圓形的轉(zhuǎn)子，一套真空系統(tǒng)和一套光學(xué)系統(tǒng)所組成。

65、該轉(zhuǎn)子通過(guò)一個(gè)柔性的軸聯(lián)接一個(gè)高速的驅(qū)動(dòng)裝置，這軸可使轉(zhuǎn)于在旋轉(zhuǎn)時(shí)形成自己的軸。

66、轉(zhuǎn)子在一個(gè)冷凍的真空腔中旋轉(zhuǎn)，其容納二個(gè)小室：分析室和配衡室有上下二個(gè)平面的石英窗，離心機(jī)中裝有的光學(xué)系統(tǒng)可保證在整個(gè)離心期間都能觀察小室中正在沉降的物質(zhì)，可以通過(guò)對(duì)紫外光的吸收(如對(duì)蛋白質(zhì)和DNA)或折射率的不同對(duì)沉降物進(jìn)行監(jiān)視，后一方法的原理是：當(dāng)光線通過(guò)一個(gè)具有不同密度區(qū)的透明液時(shí)，在這些區(qū)帶的界面上產(chǎn)生光的折射。

67、在分析室中物質(zhì)沉降時(shí)重粒子和輕粒子之間形成的界面就象一個(gè)折射的透鏡，結(jié)果在檢測(cè)系統(tǒng)的照相底板上產(chǎn)生一“峰”。

68、由于沉降不斷進(jìn)行，界面向前推進(jìn)，故“峰”也在移動(dòng)，從峰移動(dòng)的速度可以得到物質(zhì)沉降速度的指標(biāo).。

本文分享完畢，希望對(duì)大家有所幫助。

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