關(guān)于革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌哪個更優(yōu)勢,革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的區(qū)別這個問題很多朋友還不知道,今天小六來為大家解答以上的問題,現(xiàn)在讓我們一起來看看吧!
1、革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法,1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立 細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶染色,而經(jīng)碘液媒染后,用酒精脫色,在一定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去,有的可被脫去,因此可把細(xì)菌分為兩大類,前者叫做革蘭氏陽性菌(G+),后者為革蘭氏陰性菌(G—)。
2、為觀察方便,脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復(fù)染。
3、陽性菌仍帶紫色,陰性菌則被染上紅色。
4、有芽胞的桿菌和絕大多數(shù)和球菌,以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應(yīng);弧菌,螺旋體和大多數(shù)致病性的無芽胞桿菌都呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。
5、 [原理]:革蘭氏染色目前有三種觀點(diǎn):等電點(diǎn)學(xué)說、化學(xué)學(xué)說和滲透學(xué)說。
6、 1. 等電點(diǎn)學(xué)說,革蘭氏陽性菌的等電點(diǎn)在PH2-3,比陰性菌(PH4-5)低,加之碘為弱氧化劑,可降低革蘭氏陽性菌的等電點(diǎn),致使兩類菌的等電點(diǎn)差異擴(kuò)大,因此陽性菌和堿性染料的結(jié)合力比陰性菌更強(qiáng)。
7、 2.化學(xué)學(xué)說,碘液在菌體內(nèi)與結(jié)晶紫結(jié)合后又和菌體內(nèi)核糖核酸鎂鹽-蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)合,此結(jié)合物不易被丙酮酒精脫掉,呈革蘭氏染色陽性。
8、因革蘭氏陰性菌缺乏核糖核酸鎂鹽,故對碘與結(jié)晶紫結(jié)合物攝取少,且不牢固,易被丙酮酒精脫色而呈革蘭氏染色陰性。
9、 3.滲透學(xué)說,乙醇使陽性菌所含粘肽多糖脫水而致細(xì)胞壁間隙縮小,通透性降低,在菌體內(nèi)保留了染料-碘復(fù)合物,呈紫色。
10、陰性菌含粘肽少,細(xì)胞壁變化不大,通透性不受影響,菌體內(nèi)的染料-碘復(fù)合物較易透出,失去紫色,被復(fù)染成為紅色。
11、 [試劑]:Crystal violet(結(jié)晶紫)、Gram Iodine(碘液)、Decolourizer(丙酮酒精)、Safranin(稀釋沙黃) [操作]: 1.標(biāo)本處理:(1).有菌部位的標(biāo)本,如痰液、糞便、各種拭子、創(chuàng)面等可直接涂片。
12、 (2).無菌部位的標(biāo)本,如腦脊液、胸水、腹水、膽汁、尿液、關(guān)節(jié)液等,應(yīng)取適量標(biāo)本(最高可達(dá)5-7ml),經(jīng)3000rpm 離心10min.,取沉渣涂片染色。
13、 2.涂片制作:菌液涂片時,用接種環(huán)沾取菌液點(diǎn)在載玻片上,標(biāo)本可直接在玻片上涂布;菌落涂片時,先取生理鹽水一滴,置玻片上,用接種針挑取菌落在鹽水中涂布。
14、制作的涂片應(yīng)自然干燥,并經(jīng)火焰固定,固定的溫度不宜過高,以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn),否則可能使細(xì)菌形態(tài)改變。
15、將固定后的涂片進(jìn)行染色。
16、 3. 染色方法: (1).加上Crystal violet(結(jié)晶紫)后,染色3-5秒或更久,之后用自來水沖洗之。
17、 (2).加上Gram Iodine(碘液)后染色3-5秒或更久,之后用自來水沖洗之。
18、 (3).以Decolourizer(丙酮酒精)脫色約5-10秒,并用自來水沖洗之。
19、 (4).加上Safranin(稀釋沙黃)后,染色3-5秒或更久,之后用自來水沖洗之。
20、 (5).吸干或在空氣中涼干后,置油鏡鏡檢。
21、 4.結(jié)果觀察:紫色為革蘭氏陽性,紅色為革蘭氏陰性。
22、 [報告方式]:革蘭氏染色:檢出革蘭氏陽性球菌 ;革蘭氏陰性球菌 檢出革蘭氏陽性桿菌 ;革蘭氏陰性桿菌 [注意事項(xiàng)]: 1.標(biāo)本涂片不能太厚,嚴(yán)格按操作要求進(jìn)行。
23、 2.玻片通過火焰溫度不能太高。
24、 3.若涂片較厚,應(yīng)延長脫色時間,直至不在出現(xiàn)紫色為止。
25、 [臨床意義]:通過革蘭氏染色,將細(xì)菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性,便于臨床治療。
26、 [附] 1 沙黃(番紅)Safranine T [C20H19ClN4=350.85] 紅棕色粉末;堿基性染料。
27、在水中溶解,在乙醇中易溶。
28、 2 碘液配制:0.01mol/l碘液——稱取1.3g碘,置于50mol燒杯中,加入2.5g碘化鉀及25毫升蒸餾水,不斷攪拌之,使其溶解均勻。
29、再加0.2mol濃鹽酸(體積質(zhì)量1.19g/cm3),再加蒸餾水稀釋到1000mol。
30、溶液應(yīng)貯藏在棕色試劑瓶中,儲于低溫暗櫥內(nèi)。
31、有效期為一個月左右 革蘭氏陰性菌,以[大腸桿菌]為代表。
32、大腸桿菌為兼氣性菌種,一般生存於腸道中及厭氧的還境中。
33、革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的特徵為有一層out member 與陽性菌種不同。
34、目前對大腸桿菌的研究很多,除了它是一般食物中是否有被污染的指標(biāo)外,很多分子生物學(xué)方面的研究皆需要使用到大腸桿菌當(dāng)作實(shí)驗(yàn)宿主。
本文分享完畢,希望對大家有所幫助。
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